2-[[2-Étoxy-4-[[4-hydroxy-1-piperidinyl) phényl]amino]-5,11-dihydro-5,11-diméthyl-6H-pyrimide[4,5-b][1,4]benzodiazépine-6-

Description du produit:

Nom du produit: 2-[[2-Etoxy-4-(4-hydroxy-1-piperidinyl) phényl]amino]-5,11-dihydro-5,11-diméthyl-6H-pyrimide[4,5-b][1,4]benzodiazépine-6-un CAS NO:1234480-50-2

Synonymes:

XMD 8-92 (base libre);

6H-pyrimide[4,5-b][1,4]benzodiazépine-6-un,2-[[2-étoxy-4-(4-hydroxy-1-piperidinyl)phényl]amino]-5,11-dihydro-5,11-diméthyl-;

Propriétés chimiques et physiques:

Apparence: poudre blanche à presque blanche

Détail de l'analyse: ≥ 98,0%

Densité:10,3 g/cm3

Point d'ébullition:7410,8°C à 760 mmHg

Point de sursaut:402.4°C

En vitro

XMD8-92 présente la plus grande affinité pour BMK1 avec une constante de dissociation mesurée (Kd) de 80 nM, tandis que DCAMKL2, TNK1 et PLK4 présentent respectivement des Kd?? de 190, 890 et 600 nM.Le XMD8-92 est détecté par rapport à toutes les kinases détectables dans les lysates de cellules HeLa à l'aide de la méthode KiNativ et se trouve être environ 10 fois plus sélectif pour BMK1 avec une IC50 de 1..5 μM de plus que les cibles off-targets les plus puissantes, TNK1 (IC50=10 μM) et ACK1 (alias TNK2, IC50=18 μM).MEK5 n'est pas significativement inhibé par XMD8-92 jusqu'à 50 μM [1]. XMD8-92 montre une forte sélectivité à l'égard de BMK1 dans un test de compétition in vitro de liaison au site de l'ATP contre 402 kinases ainsi que dans la méthode KiNativ contre toutes les kinases détectables dans les lysates de cellules HeLa.XMD8-92 bloque l'activation de BMK1 induite par l'EGF avec une IC50 de 240 nM et, à une concentration allant jusqu'à 5 μM, XMD8-92 n'a aucun effet inhibiteur sur l'activation de l'ERK1/2 par l'EGF[2].

En direct

XMD8-92 inhibe de manière significative la croissance tumorale in vivo de 95%. La pharmacocinétique de XMD8-92 est évaluée chez les rats Sprague-Dawley ayant reçu une dose intraveineuse ou orale unique.0 heure clairance de la demi-vie de 26 ml/min/kg. XMD8-92 a une distribution tissulaire modérée avec un volume de distribution calculé de 3,4 L/ kg. XMD8-92 a une biodisponibilité orale élevée avec 69% de la dose absorbée.Après une dose orale unique de 2 mg/kg, des concentrations plasmatiques maximales d'environ 500 nM sont observées après 30 minutes, avec 34 nM restant 8 heures après la dose.les concentrations plasmatiques élevées du médicament (environ 10 μM après une posologie IP de 50 mg/kg) sont maintenues pendant 14 jours. XMD8-92 semble être bien toléré et les souris semblaient en bonne santé sans aucun signe de détresse. Aucune instabilité vasculaire n'est observée chez les souris traitées par XMD8-92[1].Le traitement par XMD8-92 chez des souris immunocompétentes et immunodéficientes a bloqué la croissance des tumeurs du xenographe du poumon et du col utérin., respectivement, de 95%. This remarkable anti-tumor effect of XMD8-92 in lung and cervical xenograft tumor models is due to XMD8-92’s capacity to inhibit tumor cell proliferation through the PML suppression-inducted p21 checkpoint proteinEn outre, le knock-out (KO) de BMK1 chez la souris entraîne une suppression complète et irréversible de la protéine BMK1,alors que le traitement par XMD8-92 chez la souris ne supprime que l' activité de la BMK1Deuxièmement, l'instabilité vasculaire observée chez les souris KO BMK1 peut être due à l'absence du domaine non kinase C-terminal de BMK1.qui est toujours présent lors du traitement des animaux par XMD8-92 [2].

Analyse de la kinase

Le profilage KiNativ de XMD8-92 est effectué à la fois avec une ATP et une ADP acylphosphate-desthiobiotine avec les modifications suivantes.Les lysates de cellules HeLa (5 mg/ml de protéine totale) sont incubés en présence de XMD8-92 à 50 μM., 10 μM, 2 μM, 0,8 μM et 0 μM pendant 15 minutes avant l'ajout de la sonde d'ATP ou d'ADP acylphosphate (5 μM de concentration finale de la sonde).Les réactions de la sonde se sont poursuivies pendant 10 minutes et la réaction a été arrêtée par l'ajout d'urée et traitée pour l'analyse de la SEP.. Samples are analyzed by LC-MS/MS on a linear ion trap mass spectrometer using a time segmented “target list” designed to collect MS/MS spectra from all kinase peptide-probe conjugates that can be detected in HeLa cell lysatesCette liste de cibles est générée et validée par une analyse préalable exhaustive des lysates d'héla.Jusqu'à quatre ions de fragments caractéristiques pour chaque kinase conjugué peptide-sonde sont utilisés pour extraire des signaux pour chaque kinase, et une comparaison des lysates traités par un inhibiteur avec des lysates témoins (non traités) permettent de déterminer avec précision le pourcentage d'inhibition à chaque point.Un manuscrit décrivant les détails de cette approche de spectrométrie de masse ciblée est en préparation [1].

Administrateur des animaux

Souris[1] Les cellules HeLa 5×105 sont ré-suspendues dans DMEM et injectées sous-cutanée dans le flanc droit des souris Nod/Scid âgées de 6 semaines (jour 0).Les souris sont randomisées en 2 groupes (6 animaux)Le groupe XMD8-92 (1-28 jours) est traité par XMD8-92 à la dose de 50 mg/ kg deux fois par jour par voie intra-péritonéale.Le groupe témoin reçoit des injections quotidiennes de la solution porteuse en tant que groupe témoin.Le 7e jour, le groupe témoin est randomisé en 2 groupes (6 animaux, XMD8-92, 7-28 jours, et 12 animaux, contrôle).le groupe témoin restant est randomisé en 2 groupes (6 animaux)Le traitement par XMD8-92 dans les groupes XMD8-92 (7-28 jours) et XMD8-92 (14-28 jours) est commencé respectivement le 7e et le 14e jour.La taille de la tumeur est mesurée avec une pince, et le volume de la tumeur est déterminé[1].

Les références:

[1] Yang Q, et al. L'inhibition pharmacologique de BMK1 supprime la croissance tumorale par une protéine de la leucémie promyélocytique.

Yang Q, et al. Le ciblage de la voie de la kinase BMK1 MAP dans le traitement du cancer.

La kinase ALK stimule la kinase ERK5 pour favoriser l'expression du MYCN oncogène dans le neuroblastome. Sci Signal. 2014 Oct 28;7 ((349):ra102.

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